技术服务-纯化案例
l 胰蛋白酶、糜蛋白酶的一步分离纯化
—独家工艺,转产两家企业
工艺过程:
(1) 猪胰腺创片、绞碎;
(2) 提取液过浆、压滤、浓缩:
(3) 盐析过滤,得滤饼;
(4) 盐析物激活、脱盐;
(5) DEAE-琼脂糖凝胶FF层析分离;
(6) 胰蛋白酶、糜蛋白酶分别用10KD膜超滤浓缩脱盐
(7) 冷冻干燥成品。
核心技术:(1)采用DEAE-琼脂糖凝胶FF—步联产眱蛋白酶、糜蛋白酶两种单体蛋白酶:(2)纯化的胰蛋白酶比活600umg,糜蛋白酶比活1500u/mg,产品收率好,纯度高:(3)该项技术具有国际水平,已转让国内两家生物技术公司实现规模化生产。
内毒素检查:纯化的胰蛋白酶、糜蛋白酶单体内毒素限量符合CP,USP、EP标淮要求。
l 高纯度胰激肽原酶的纯化
工艺过程;:
(1) 猪胰腺创片、绞碎;
(2) 提取、浆液过滤、浓缩;
(3) 盐析
(4) 粗品溶解、过滤、脱盐:
(5) 仿生亲和琼脂糖凝胶层析分离:
(6) 解析胰激肽原酶用10KD膜超滤浓缩脱盐,除菌;
(7) 冷冻干燥成品。
核心技术:(1)胰激肽原酶提取过程容易被其它蛋白酶分解,收率很低;该工艺可确保胰激肽原酶不被水解,大幅提高产品收率;(2)采用仿生亲和琼脂糖凝胶可一步制得比活800umg以上、纯度95%的高活性胰激肽原酶。
内毒素检查:纯化胰激肽原酶内毒素限量符合CP2010标准要求。
l 玻璃酸酶的分离纯化:
工艺过程:(1)羊(牛)睾丸冰冻绞碎;(2)酸性提取、过浆、过滤、浓缩;
(3)清液分级盐析,得粗品;(4)粗品溶解、过滤、脱盐;(5)肝素-琼脂糖凝胶FF层析分离:(6)玻璃酸酶解析液超滤浓缩、脱盐、除菌;(7)冷冻干燥得成品。
2、核心技术;(1)采用肝素-琼脂糖凝胶FF一步纯化玻璃酸酶;(2)纯化的玻璃酸酶活性1400umg以上产品收率高。
3、内毒素检查;纯化的玻璃酸酶内毒素限量符合CP、USP、EP标准要求。
l 蛋白质、蛋白酶及血清内毒素的去除
1. 工艺过程:(1)选择性采用DEAE-琼脂糖凝胶FF吸附内毒素:(2)选择性采用组氮酸琼脂糖凝胶6FF吸附内毒素。
2. 核心技术:(1)DEAE-琼脂糖凝胶FF去除内毒素效果最佳,适合大部分组织蛋白内毒素的去除:(2)组氨酸-琼脂糖凝胶6FF用于血清内毒素的去除,不会稀释和吸附血清的有效成分,内毒素吸附载量可达1-2mgml凝胶。(3)一般不采用多粘菌素-琼脂糖凝胶6FF去除内毒素,配基多粘菌素脱落克导致新的细胞毒性。
3. 内毒素检查-纯化的产品内毒素限量符合CP、USP、EP标准要求。